当前位置:
产品展示Products
RT-PCR技术服务
RT-PCR技术服务
更新时间:2016-11-16
型    号:
所属分类:外包技术服务
报    价:
分享到:

RT-PCR技术服务

RT-PCR技术服务产品概述:

反转录PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外,RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性,还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法,可满足客户不同的实验要求。
样品要求:提供的样品要新鲜并尽可能多,不推荐提供RNA样品,或者提供cDNA,并尽可能详细的提供背景资料(基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等)。

基本步骤
● 模板制备:见RNA提取技术服务。
● 引物设计
    客户提供上、下游引物,或者我公司提供免费的引物设计及合成(包括RT-PCR半定量检测中的内参引物)。
● 反转录
(1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。
 

 试剂名称 使用量
 模板RNA 2μg
 Oligo(dT)12-18 Primer(50μM) 2.5μl

(2)70℃保温5分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。 
(3)离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于Microtube管底部。 
(4)在上述Microtube管中配制下列反转录反应液。
 

 试剂名称 使用量
 上述模板RNA/引物变性溶液 
 5×M-MLV Buffer 5μl
 dNTP Mixture(各10 mM) 1.25μl
 RNase Inhibitor(40 U/μl ) 25U
 M-MLV(200 U/μl ) 200U 
 RNase free dH2O up to 25μl

42℃保温1小时。 
(5)70℃保温15分钟后冰上冷却,得到cDNA溶液。
若需要表达,参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析,接着以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR扩增目的基因及看家基因,产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。

RNA模板的制备需另收费(见RNA提取服务)以上为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时,同一材料的多个目的基因的价格=1个目的基因价格×目的基因个数。
提供结果
完整的实验操作步骤、电泳图、定量分析结果等。
 

留言框

  • 产品:

  • 留言内容:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 详细地址:

  • 省份:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
联系人
在线客服
用心服务成就您我
友情链接:PK10开奖视频  PK10直播  PK10开奖  PK10直播  PK10开奖视频  PK10开奖视频  北京赛车开奖直播  PK10开奖  PK10开奖  PK10开奖  北京赛车开奖直播  北京赛车开奖直播  PK10开奖记录  PK10开奖视频  PK10开奖记录  PK10开奖视频  北京赛车开奖直播  PK10开奖  PK10开奖记录  PK10开奖视频  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!