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小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)培养说明书
点击次数:246 发布时间:2018-10-11

小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)

货号:MNCL-009

 

细胞介绍

细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。

 

细胞特性

1) 来源:BALB/c小鼠

2) 形态内皮细胞

3) 含量:>1x106 个/mL

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

 

运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,1000RPM,常温条件,离心5min后,洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

 

细胞用途:仅供科研使用。

                       

细胞培养步骤

一.培养基培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液90%完全培养基,10%DMSO,现用。液氮储存。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO进行冻存。

 

注意事项:

1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性,必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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